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糖尿病及其并發(fā)癥的實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)及方法學(xué)評價(jià)

2016-11-07 來源:糖尿病好醫(yī)生  標(biāo)簽: 掌上醫(yī)生 喝茶減肥 一天瘦一斤 安全減肥 cps聯(lián)盟 美容護(hù)膚
摘要:胰島素原由胰島素和C肽所組成,是二者的前體。胰島素原是含有一個胰島素和一個C肽的完整分子,因此其具有兩者的免疫活性,既可與胰島素抗體又可與C肽抗體發(fā)生交叉反應(yīng)。

  隨著世界經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、居民生活水平的提高以及生活方式的改變和人口老齡化等,糖尿病患病率在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢,成為繼心腦血管疾病、腫瘤之后的又一嚴(yán)重危害大眾健康的慢性非傳染性疾病。早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷及正確治療糖尿病,能明顯改善糖尿病病人的生活質(zhì)量,降低糖尿病并發(fā)癥及病死率。而糖尿病的診斷、分型、病情的進(jìn)展、并發(fā)癥的判斷及預(yù)后都與實(shí)驗(yàn)室檢查密切相關(guān)。檢測項(xiàng)目的科學(xué)選擇及檢測結(jié)果的正確評價(jià)都將直接關(guān)系到患者的治療效果。

  臨床工作中常用糖尿病檢測指標(biāo)分析:

 ?。ㄒ唬┢咸烟堑臋z測

  酶法為推薦使用的測定方法(如:己糖激酶法或葡萄糖氧化酶法)。

  1.標(biāo)本收集和貯存大多數(shù)臨床采用血漿或血清測葡萄糖濃度,而大多數(shù)床旁測定葡萄糖的方法使用的是全血。使用不同的標(biāo)本應(yīng)采用不同的參考值。

  室溫下,血細(xì)胞中進(jìn)行的糖酵解使血中葡萄糖減少,在獲得標(biāo)本后應(yīng)盡快測定。通過向標(biāo)本中加碘乙酸鈉或氟化鈉可抑制糖酵解作用,使血葡萄糖在室溫下穩(wěn)定3天。

  2.已糖激酶法

 ?。?)原理:在有已糖激酶(hexokinase)和Mg2+存在下,葡萄糖被ATP磷酸化為6-磷酸葡萄糖。在NADP+參與下,葡萄糖-6-磷酸脫氫酶將6-磷酸葡萄糖氧化為6-磷酸葡萄糖酸,同時(shí)NADP+轉(zhuǎn)變?yōu)镹ADPH。NADPH生成量與標(biāo)本中葡萄糖含量成正比,可以在340nm波長檢測NADPH吸光度變化,定量葡萄糖。用從酵母中獲得的G-6-PD,需NADP+作為輔因子。如使用細(xì)菌來源的G-6-PD,則以NAD+作為輔因子,NADH的生成量也在340nm測定;

  (2)評價(jià):該法準(zhǔn)確度和精密度高,特異性高于葡萄糖氧化酶法,適用于自動化分析,為葡萄糖測定的參考方法。輕度溶血、脂血、黃疸、氟化鈉、肝素、EDTA和草酸鹽等不干擾本法測定。

  3.葡萄糖氧化酶法

 ?。?)原理:葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase,GOD)催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸和過氧化氫(H2O2),再加入過氧化物酶和色原性氧受體(如聯(lián)大茴香胺,4-氨基安替比林偶聯(lián)酚),生成有色化合物,比色定量。

 ?。?)評價(jià):GOD高特異性催化β-D-葡萄糖。而葡萄糖α和β構(gòu)型各占36%和64%。要使葡萄糖完全反應(yīng),必須使α-葡萄糖變旋為β-構(gòu)型。某些商品試劑中含有變旋酶,可加速變旋過程。也可延長孵育時(shí)間,通過自發(fā)性變旋來轉(zhuǎn)化。過氧化物酶的特異性遠(yuǎn)低于GOD。尿酸、維生素C、膽紅素、血紅蛋白,四環(huán)素和谷胱甘肽等可抑制呈色反應(yīng)(通過與H2O2競爭色素原受體),用Somogyi過濾可以除去大部分干擾物質(zhì)。

  4.尿葡萄糖測定

  尿糖檢測快速、廉價(jià)和無創(chuàng)傷性,適用于大規(guī)模樣本的篩選。

 ?。ǘ┩w的檢測

  酮體(ketonebodies)由乙酰乙酸、β-羥丁酸和丙酮組成。最主要的來源為游離脂肪酸在肝臟的氧化代謝產(chǎn)物。由于尿酮體檢測的方便性,已廣泛用于I型糖尿病的病情監(jiān)測。Acetest和Ketostix法都適于對尿酮體測定。其特異性和靈敏度與測定血清時(shí)相同。

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  (四)糖化蛋白的檢測

  糖基化是指通過非酶促作用將糖基加到蛋白質(zhì)的氨基酸基團(tuán)上。測定糖化蛋白(glycatedprotein)可為較長時(shí)間段的血糖濃度提供回顧性評估,而不受短期血糖濃度波動的影響。

  1.糖化血紅蛋白

  糖化Hb的形成是不可逆的,其濃度與紅細(xì)胞壽命(平均120天)和該時(shí)期內(nèi)血糖的平均濃度有關(guān),不受每天葡萄糖波動的影響,也不受運(yùn)動或食物的影響,所以糖化Hb反映的是過去6~8周的平均血糖濃度,這可為評估血糖的控制情況提供可靠的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。

  糖化Hb測定方法的原理有多種:①根據(jù)電荷差異:離子交換層析,高效液相層析(HPLC),電泳和等電聚焦電泳:②根據(jù)結(jié)構(gòu)差異:親和層析和測定法;③化學(xué)分析:比色法、分光光度法。

  2.果糖胺

  除了血紅蛋白,葡萄糖也可通過非酶促糖基化反應(yīng)與其他蛋白(如清蛋白,膜蛋白,晶狀體)結(jié)合形成酮胺(ketoamine)。由于清蛋白的產(chǎn)生比血紅蛋白快(清蛋白半壽期約為20天),所以糖化清蛋白的濃度反映的是近2~3周血糖的情況。

  3.糖化終末產(chǎn)物

  (五)尿清蛋白排泄試驗(yàn)

  糖尿病患者有很高的腎臟損害風(fēng)險(xiǎn)。大約1/3的I型糖尿病者最終發(fā)展為慢性腎衰。常規(guī)檢查發(fā)現(xiàn)尿清蛋白排泄(urinaryalbuminexcretion,UAE)增加,持續(xù)性尿蛋白定性陽性(相當(dāng)于尿清蛋白排泄率≥200μg/min),提示已有明顯的糖尿病性腎病。

 ?。?a target="_blank" href="http://www.coldnoir.com/tnbpd/tnbzl/yds/" name="InnerLinkKeyWord">胰島素與胰島素抗體的檢測

  1.胰島素測定

  2.胰島素抗體

  胰島素抗體檢測方法均為免疫學(xué)方法,如RIA、免疫親和層析法等。

 ?。ㄆ撸┮葝u素原的檢測

  胰島素原由胰島素和C肽所組成,是二者的前體。胰島素原是含有一個胰島素和一個C肽的完整分子,因此其具有兩者的免疫活性,既可與胰島素抗體又可與C肽抗體發(fā)生交叉反應(yīng)。胰島素原具有與胰島素相同的生物學(xué)作用,其活性弱于胰島素。

  (八)C-肽的檢測

  C肽(C-Peptide)又稱連接肽,是胰島β細(xì)胞的分泌產(chǎn)物,它與胰島素有一個共同的前體——胰島素原。一個分子的胰島素原經(jīng)酶切后,裂解成一個分子的胰島素和一個分子的C肽。測定C肽比胰島素有更多優(yōu)點(diǎn)。

  因?yàn)榭梢院雎愿闻K的代謝,所以與外周血胰島素濃度相比,C肽濃度水平可更好地反映β細(xì)胞功能。C肽不受外源性胰島素干擾且不與胰島素抗體反應(yīng)。C肽常與胰島素和OGTT(口服葡萄糖耐量測定)同時(shí)測定。

  1、低血糖:(1)糖尿病伴胰島B細(xì)胞瘤患者,血清胰島素與C肽濃度均升高;(2)外源性胰島素過量所致低血糖患者,則血清胰島素升高,而C肽降低;(3)胰島B細(xì)胞瘤術(shù)后,血清C肽仍高,提示腫瘤未完全初切除或有復(fù)發(fā)。

  2、肝硬化:血清C肽升高,C肽/胰島素比值降低。

  3、糖尿病:存在胰島素抗體時(shí),只有用C肽檢測來了解胰島B細(xì)胞功能。

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