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《三維微團培養(yǎng)調節(jié)軟骨細胞骨架蛋白對成軟骨表型的影響》

2017-08-23 來源:骨大夫網(wǎng)  標簽: 掌上醫(yī)生 喝茶減肥 一天瘦一斤 安全減肥 cps聯(lián)盟 美容護膚
摘要:研究軟骨細胞骨架蛋白結構改變與成軟骨細胞表型改變的關系,初步闡述軟骨細胞骨架變化在骨關節(jié)炎發(fā)病機制中的作用。

  目的 研究軟骨細胞骨架蛋白結構改變與成軟骨細胞表型改變的關系,初步闡述軟骨細胞骨架變化在骨關節(jié)炎發(fā)病機制中的作用。

  方法 采用三維微團培養(yǎng)(pellet culture)法培養(yǎng)新西蘭兔膝關節(jié)軟骨細胞,2周后加用秋水仙堿、細胞松弛素 B 及丙烯酰胺分別作用于軟骨細胞骨架的微管、肌動蛋白微絲及波形蛋白中間纖絲,繼續(xù)培養(yǎng) 1 周、3 周后分別從大體形態(tài)、組織切片染色、免疫組化染色及 PCR 技術分析對照組、秋水仙堿組、細胞松弛素 B組及丙烯酰胺組成軟骨細胞表型的改變。

  結果 pellet culture 法培養(yǎng)軟骨細胞,2 周后可形成肉眼明顯可見的細胞微團組織;加用秋水仙堿、細胞松弛素 B 及丙烯酰胺處理 1 周時各組形成細胞微團大小無明顯差別,3 周時對照組大小較其它各組明顯;HE 染色顯示 1 周時對照組細胞多邊形,核仁明顯,細胞分布均勻、密集,秋水仙堿組及細胞松弛素 B 組和對照組相比無明顯差異,而丙烯酰胺組細胞較少,分散;3 周時對照組細胞圓形,形成類軟骨陷窩結構,秋水仙堿組、細胞松弛素 B 組及丙烯酰胺組細胞形態(tài)不規(guī)則;阿爾新藍染色顯示 1 周時對照組軟骨細胞周圍深染,基質染色稍淺,秋水仙堿組及細胞松弛素 B 組和對照組相比無明顯差異,而丙烯酰胺組軟骨細胞周圍及基質染色均較淺,3 周時四組染色無明顯區(qū)別;免疫組化染色顯示 1 周、3 周時對照組 COLⅡ深染,COLⅠ淡染,秋水仙堿組及細胞松弛素 B 組和對照組相比無明顯差異,而 1 周時丙烯酰胺組 COLⅡ及 COLⅠ染色相差不大,3 周時 COLⅠ染色較深;PCR 檢測顯示 1 周、3 周時對照組、秋水仙堿組、細胞松弛素 B 組及丙烯酰胺組 COLⅡ、Aggrecan 表達呈下降趨勢,而 COLⅠ表達呈上升趨勢,對照組和秋水仙堿組、細胞松弛素 B 組相比,差異無統(tǒng)計學意義,對照組和丙烯酰胺組相比,P<0.05,差異有統(tǒng)計學意義。

  結論 調節(jié)細胞微團中軟骨細胞波形蛋白中間纖絲,可使軟骨細胞 COLⅡ、Aggrecan 下降,COLⅠ表達上調。

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