HBV分子病毒學(xué)研究中常用的幾種肝細(xì)胞（系）

2018-07-28 來源：中國病毒學(xué)論壇標(biāo)簽：掌上醫(yī)生喝茶減肥一天瘦一斤安全減肥 cps聯(lián)盟美容護(hù)膚

摘要：最經(jīng)典的肝癌細(xì)胞系之一，大約30多年前分離自一位15歲美國白人男孩的肝癌組織，形態(tài)為上皮細(xì)胞，極性細(xì)胞；乙肝表面抗原陰性，對G418有抗性。

1.HepG2

最經(jīng)典的肝癌細(xì)胞系之一，大約30多年前分離自一位15歲美國白人男孩的肝癌組織，形態(tài)為上皮細(xì)胞，極性細(xì)胞；乙肝表面抗原陰性，對G418有抗性。由ATCC收錄。主要特點是可以大規(guī)模培養(yǎng)，對除ViralEntrystep之外的HBVlifecycle支持度好，是研究HBV基因表達(dá)/病毒復(fù)制的重要模型。缺點是培養(yǎng)時容易成團(tuán)疊層成菌落狀，最好先用collagen處理培養(yǎng)瓶/皿。

2.Huh-7

1982年（也是大約30年前）分離自一位57歲日本男性的肝癌組織。上皮樣細(xì)胞，但為非極性細(xì)胞（2D培養(yǎng)下），乙肝表面抗原陰性。由JCRBCellBank收錄。優(yōu)點類似HepG2細(xì)胞，相比更易于培養(yǎng)，且轉(zhuǎn)染效率更高，瞬時轉(zhuǎn)染HBV表達(dá)質(zhì)粒后上清中可收獲10^6-10^7copies/ml的病毒顆粒。缺點是該細(xì)胞未被ATCC收錄，市面上存在不少亞克隆，來源不單一，導(dǎo)致不同實驗室的來源不同的Huh-7細(xì)胞株上的結(jié)果很可能無法直接比較。

3.HepG22.2.15

1987年由西奈山醫(yī)學(xué)院的研究人員構(gòu)建（作者之一是中國人Mei-LingCHEN）。通過轉(zhuǎn)染將兩對“頭尾相接”的HBV基因組dimer整合入HepG2細(xì)胞基因組。該細(xì)胞系在分化培養(yǎng)條件下可以產(chǎn)生高滴度的HBV感染性顆粒（~10^8copies/ml）,同時核內(nèi)可檢測到cccDNA的存在（盡管含量很低），一直是抗HBV藥物篩選的重要細(xì)胞模型。缺點是該細(xì)胞系太過古老且缺乏原始種子庫，導(dǎo)致在連續(xù)培養(yǎng)快三十年后，其細(xì)胞生物學(xué)特性和祖細(xì)胞HepG2差異很大，缺乏合適的對照，無法作為功能基因研究的合適模型了。

考慮到這一問題，美國和德國的相關(guān)研究人員基于HepG2又各自建立了另外兩種新細(xì)胞系：HepAD38和HepG2H1.3。前者包含1.1拷貝的整合HBV基因組，其表達(dá)由誘導(dǎo)型CMV-tet啟動子調(diào)控，病毒產(chǎn)量甚至高于HepG22.2.15，分化培養(yǎng)所需時間也較短。后者包含1.3拷貝的整合HBV基因組，使用HBV自身的啟動子，相對比較接近體外感染過程中/后的HBV-CellInteraction，適合用于HBV相關(guān)功能基因（組）的研究。

4.PHH（primaryhumanhepatocytes）

人原代肝細(xì)胞體外分離培養(yǎng)技術(shù)，由德國科學(xué)家于2003年建立。作為原代細(xì)胞，自然有著任何腫瘤細(xì)胞系所無法匹敵的優(yōu)點，能夠被HBV直接感染，接近自然感染過程中生理學(xué)生物學(xué)指標(biāo)，是目前最為可靠的體外感染模型。利用灌流技術(shù)從手術(shù)切除的患者正常肝組織中分離PHH，目前技術(shù)上已經(jīng)相當(dāng)成熟，但操作上仍比較復(fù)雜，對肝源質(zhì)量和培養(yǎng)條件要求苛刻，細(xì)胞本身無法傳代，生命周期有限，尤其考慮其細(xì)胞來源的特殊性，顯然是無法規(guī)模化推廣的，僅限于少數(shù)實驗室的“奢侈品”。

5.HepaRG

由法國科學(xué)家于2002年建立，是一種具有定向分化潛力的肝臟祖細(xì)胞，在體外分化培養(yǎng)條件下可以定向分化為具有肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞功能及特征的細(xì)胞。分化后的HepaRG細(xì)胞在形態(tài)和功能上和PHH非常接近，是目前唯一可以被HBV體外感染的非腫瘤細(xì)胞系，具備包含Viralentrystep在內(nèi)的完整HBVlifecycle，應(yīng)該說是HBV病毒學(xué)研究及新藥篩選的最佳工具。

HepaRG細(xì)胞的主要缺點是，對培養(yǎng)條件要求非常嚴(yán)格，且細(xì)胞需要連續(xù)培養(yǎng)并分化大約4周，之后如果一切無誤方能用于HBV感染實驗。此外，即便是有經(jīng)驗的研究人員提供了最理想的培養(yǎng)條件，HBV在HepaRG上的感染效率也只有大約10-15%（即便是PHH也同樣如此），復(fù)制水平遠(yuǎn)沒有基于質(zhì)粒轉(zhuǎn)染來的高，這也正是目前體外感染實驗的瓶頸所在。另有研究表明，HepaRG感染HBV之后的cccDNA水平較低，未能檢測到顯著的rcDNA-cccDNArecycling，其原因還有待進(jìn)一步的探索。

6.L02

非腫瘤的正常人肝細(xì)胞株（也有資料說是人胚胎肝細(xì)胞株，不能確定）。很可惜從來沒有用過這個細(xì)胞株，也未能查到該細(xì)胞具體的來源信息，希望有知情的朋友可以幫忙補(bǔ)充。目前國外使用L02細(xì)胞用于HBV相關(guān)研究的報道還不多見，主要還是來自國內(nèi)的研究團(tuán)隊。作為一種區(qū)別于HepG2/HuH-7等腫瘤細(xì)胞的正常肝細(xì)胞株，在某些特定的研究背景下，L02會有其獨(dú)特的優(yōu)勢。如何被國際同行所認(rèn)可，可能是該細(xì)胞被廣泛運(yùn)用的前提。

7.HepG2-NTCP/HuH7-NTCP

由北京生命科學(xué)研究所成功鑒定出了HBV功能性受體NTCP。此項研究的核心成果及應(yīng)用之一，就是過表達(dá)NTCP的HepG2/HuH7細(xì)胞，可以成功被HBV感染（效率類似PHH/HepRG細(xì)胞）！簡單方便，任何實驗室都可以很容易的重復(fù)，相信類似的細(xì)胞系會得到非常廣泛的運(yùn)用。